《生化危机0》一共有三种难度选项，分别是简单/普通/困难，选每种难度游戏中的敌人和恢复药剂等都会有所变化，下面小编带来各种难度下的差异区别解析。
详情见下表:
除此之外，通关任意难度可以解锁水蛭猎人模式（Leech Hunter）；通关普通或困难难度可以获得衣柜钥匙（Rebecca两套服装，Billy一套服装）；以A级评价（5小时内）通关普通或困难难度可以额外获得冲锋枪；以S级评价（3个半小时内）通关普通或困难难度可以额外获得火箭发射器。
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